ВЫЯВЛЕНИЕ РОТАВИРУСА СВИНЕЙ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
Abstract
Ротавирус – кишечный патоген, вызывающий гастроэнтерит у детей и молодняка животных. Данный возбудитель является причиной значительного экономического ущерба в животноводстве. В настоящее время не существует специфических лекарственных средств для лечения ротавирусной инфекции, поэтому возможности лечения данной болезни остаются ограниченными. В связи с этим разработка технологии изготовления вакцины против ротавирусной инфекции свиней остается актуальной и востребованной. Также в качестве генетического контроля разрабатываемой вакцины необходимо иметь методику для индикации и идентификации ротавируса свиней, основанную на современных молекулярно-генетических методах, таких как ОТ-ПЦР, ПЦР-ПДРФ, секвенирование и др. В качестве объекта исследований использовали патологический материал (образцы легких, селезенки и кишечника), отобранный от павших и вынужденно убитых поросят до 10-12-дневного возраста из неблагополучных по вирусным заболеваниям хозяйств Республик Башкортостан и Татарстан. Для выделения возбудителя ротавируса использовали перевиваемые линии животных клеток SPEV и РК-15. В результате поиска наиболее специфичных генетических локусов ротавируса свиней установлено, что наиболее специфичными генами являются гены VP4, VP6 и VP7, и их можно использовать для индикации и идентификации изучаемого возбудителя. Для каждого из них разработаны специфичные праймерные комбинации с программами постановки ОТ-ПЦР. Проведённый BLASTn-анализ доказал специфичность разработанных праймеров к геному ротавирусов свиней. На вирусных изолятах, адаптированных к клеткам SPEV и РК-15, доказана работоспособность разработанных праймерных комбинаций и программ постановки ОТ-ПЦР для каждого найденного генетического локуса генома ротавируса свиней. Установлен положительный результат при исследовании 12 образцов антигенного материала (из легких, кишечника, селезенки). Разработан алгоритм индикации и идентификации ротавируса свиней с использованием ОТ-ПЦР и ПЦР-ПДРФ