Standardization of an Indirect ELISA for Diagnosis of Bovine Brucellosis

Abstract

  Bovine brucellosis, caused by the bacterium Brucella abortus, is a zoonotic disease of sanitary and economic importance, difficult to diagnose clinically, and associated with the One Health concept, classified as an occupational disease transmitted through food of animal origin, demanding greater attention to food safety. In Brazil, the National Program for the Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT) adopts official tests such as the Buffered Acidified Antigen (BAA) for screening and 2-Mercaptoethanol (2-ME) as a confirmatory test. However, the indirect ELISA test shows potential as an alternative screening method due to its high sensitivity, specificity, and large-scale processing capacity. This study aimed to standardize the indirect ELISA test for the diagnosis of Brucellosis in bovine serum samples from slaughtered animals in a meat processing plant. For standardization of the indirect ELISA technique, the commercial antigen used for the slow agglutination test was subjected to a study of optimal dilution. The cutoff point, sensitivity, and specificity were determined. For standardization, 90 serum samples were used, 45 from naturally infected animals and 45 from animals proven to be free of the disease. After standardization, the test was applied to serum samples collected at a slaughterhouse. The ELISA showed a cut-off of 0.2083, 100% sensitivity, and 97.8% specificity.  Keywords: Veterinary Serology. Immunodiagnosis. Bovine Reproductive Diseases. Serological Test  Animal Health.   Resumo  A brucelose bovina, causada pela bactéria Brucella abortus, é uma zoonose de relevância sanitária e econômica, de difícil diagnóstico clínico que está associada ao conceito de Uma Só Saúde, classificada como uma doença ocupacional e transmitida por alimentos de origem animal, demandando maior atenção à segurança alimentar. No Brasil, o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose (PNCEBT) adota testes oficiais como o Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) para triagem e o 2-Mercaptoetanol (2-ME) como teste confirmatório. Entretanto, o teste ELISA indireto apresenta potencial como método alternativo de triagem, pela elevada sensibilidade, especificidade e capacidade de processamento em larga escala. Este estudo teve como objetivo padronizar o teste ELISA indireto para diagnóstico da Brucelose em amostras de soros bovinos abatidos em abatedouro frigorífico. Para padronização da técnica ELISA indireto, utilizou-se o antígeno comercial aplicado para realização do teste de soroaglutinação lenta submetido a estudo de melhor diluição Foi determinado o ponto de corte, sensibilidade e especificidade. Para padronização foram utilizadas 90 amostras de soros de animais, sendo 45 amostras de animais naturalmente infectados e 45 animais comprovadamente livre da doença. Após a padronização, o teste foi aplicado em amostras de soros coletadas em abatedouro. O ELISA apresentou cut-off de 0.2083, sensibilidade de 100% e especificidade de 97,8%.    Palavras-chave: Sorologia Veterinária. Imunodiagnóstico. Doenças Reprodutivas Bovinas. Teste Sorológico. Sanidade Animal.